培养条件：

气相：95%空气 + 5%二氧化碳；
温度：37℃

传代方法：

第一次传代比例建议为1:2。传代后2天应更换培养液。为确保细胞培养的效果，建议同时选购更优惠的完培产品。收到细胞后，请勿立即开启瓶盖，及时检查培养瓶上的细胞名称是否与订购信息一致，以及瓶身是否有破损或漏液等异常情况。如未发现异常，可使用显微镜观察细胞生长状态，并拍照记录细胞的不同倍数（最好拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为售后服务的重要依据，若未提供照片，默认细胞状态良好。

贴壁细胞传代步骤：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，待显微镜下观察细胞是否大部分变圆并脱落，快速进行反应终止，加入5ml以上的完全培养基。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，转移悬液至15ml离心管中，1,000RPM离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（可分至两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤：

1. 采用半换液法，将培养瓶竖直静置于培养箱1小时，轻轻吸掉约3ml培养基，再补充3ml完全培养基。如培养基变色缓慢，可直接加入约500ul FBS。传代时可直接补给5ml培养基，分为两个培养瓶。一般约传代3次后，可进行离心传代以去除死细胞。
2. 离心换液法：若需分瓶，将细胞悬液收集至离心管中，1,000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后重悬混匀，然后按1:2比例分到新T25瓶中，添加6-8ml的新完全培养基以维持细胞生长活力。后续传代依据实际情况按1:2~1:5比例进行。

细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 向培养瓶中添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩及变圆情况后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1,000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，将沉淀细胞重悬于1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001）中，混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如需转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放超过24小时后再转入。

细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护设备），快速放置于37℃水浴中解冻，待冻存管无结晶后，用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1,000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项：

在运输过程中，有些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，属正常现象。如脱离较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1,000RPM离心5分钟，将上清液用作过渡培养，随后对沉淀细胞进行重悬及消化处理，最后按1:2比例进行分瓶传代并补充新的完全培养基。这时需要放入37℃、5% CO2的细胞培养箱进行培养。

细胞问题处理标准：

如细胞出现问题导致需要重新发货的情形，如：

1. 运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等情况，可申请重发；
2. 如发现污染问题，请在收到细胞后48小时内反馈真实实验结果，验证后方能重发；
3. 常温或干冰运输的细胞，若在静置或复苏后显著存活率低，请提供清晰的细胞状态照片以申请重发；
4. 如细胞在开封前出现污染，同样可申请重发；
5. 细胞活性问题需在收到细胞后7天内反馈并用台盼蓝染色法验证细胞活力，证实后可重发；
6. 在收到细胞后2天内不告知出现问题，将视为产品合格。

若在4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天的照片以及问题出现时的拍照记录，并与技术人员沟通，由其判断责任归属。如由我方责任导致重发，将照常处理；如双方有责任，则需通过协商方式处理或按合同价的50%收费重发。

一些情况下，例如客户自行造成的污染或不当操作导致细胞状态不佳，均不予重发。若未在收到2天内告知问题，也将不予重发。

为确保您在细胞实验中获得最佳体验，建议选择88858cc永利官网提供的优质产品与服务，我们始终致力于为您提供支持与帮助。