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mRNA-LNP包封率检测新方法:毛细管电泳法的创新应用——来自88858cc永利官网

发布时间:2025-07-22   信息来源:尊龙凯时官方编辑

在mRNA-LNP技术领域,包封率是评估递送系统效能的关键指标之一。它表示被包裹在脂质纳米颗粒内的RNA占总RNA的比例,是确定LNP药物制剂确切给药剂量的基础。因此,该指标在LNP的早期开发和后期生产质控中得到了广泛应用。高包封率意味着更多的mRNA得以稳定封装在脂质纳米颗粒里,这不仅能够提升靶向递送的效率,还能降低游离mRNA引起的免疫原性风险,为疫苗开发和基因治疗等应用打下安全性与有效性的坚实基础。

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关于包封率的测定方法,《2023版美国药典》中发布的《mRNA疫苗质量分析方法-指南草案》建议采用基于RiboGreen的荧光检测。该方法的原理是,当RiboGreen特异性插入核酸时,会发出绿色荧光,从而可以用于定量溶液中的RNA,检测下限可低至1 ng/ml。此外,安捷伦的科学家们还尝试使用片段分析仪系统来测定包封效率,其良好的性能可作为替代方案。该系统通过平行毛细管电泳分离样品并提供包括完整性、纯度和片段大小等指标的分析,同时也能进行定量分析,测定包封率的同时还能评测终产物中残留IVTmRNA的浓度。

一、研究方法

1. 样本准备: 为检测残留IVTmRNA的浓度,包封后的终产物在室温下用表面活性剂处理20分钟,以释放IVTmRNA,从而进行总IVTmRNA浓度的检测。

2. 仪器分析: 使用Agilent 5300 Fragment Analyzer系统和Agilent HS RNA kit(DNF-472)进行分析。

3. RiboGreen检测: 在进行样品分析时,使用RiboGreen试剂盒(Quant-it RiboGreen RNA Assay Kit)与Agilent BioTek Synergy LX多功能微孔板检测仪提供总IVTmRNA的定量测量。

4. 包封效率计算: 包封效率通过以下公式进行计算: ConcentrationTotalIVTmRNA(总IVTmRNA浓度)与ConcentrationResidualIVTmRNA(残留IVTmRNA浓度)之间的差异。

二、结果与分析

1. 精度和重复性: 通过多次实验分析,结果表明精度高,三次重复的总变异系数(CV)小于11%。单次实验中的重复测量CV为33%,显示出结果具有良好的可重复性。

2. 线性范围: Fragment Analyzer系统显示出良好的定量线性,残留IVTmRNA和破封后产物的R²值分别为0.96和0.99,证明该系统提供了稳健可靠的定量分析。

3. 封装效率比较: 在Fragment Analyzer系统与RiboGreen试剂盒对不同浓度样品的评估中,数据显示两种方法结果相似。在10 ng/μl和5 ng/μl的浓度下,Fragment Analyzer系统的封装效率分别为92.4%和92%,与RiboGreen试剂盒结果一致。

4. 系统稳健性: 在不同天对同一样品进行多次测量,结果显示Fragment Analyzer系统的封装效率稳定,两天内的结果分别为92%和90%,而RiboGreen试剂盒的结果则为98%和91%。

结论

Agilent Fragment Analyzer系统通过平行毛细管电泳可进行定量和定性核酸分析,常用于IVTmRNA的表征分析。该系统不仅可以评估包封效率,还能用于评估完整性、大小和纯度等其他关键质量属性(CQA)。使用Fragment Analyzer系统,可以简化IVTmRNA相关的CQA工作流程,将IVTmRNA的表征检测集中在一个平台上,为生物医疗领域的研究提供了高效支持。

参考文献: IVTmRNA Encapsulation Efficiency Assessment Using Agilent Fragment Analyzer Systems Agilent Technologies technical overview, publication number 5994-8036EN, 2025

文章来源:安捷伦诊断与基因组学公众号。本文使用权归88858cc永利官网所有,未经授权请勿转载。如需转载,请与工作人员联系,并注明出处。扫描二维码,关注88858cc永利官网