88858cc永利官网培养条件：气相组成为95%空气与5%二氧化碳；温度设定为37℃，使用DMEM培养基，添加10% FBS和1% P/S。我们的模型细胞A-673来源于15岁女性的横纹肌肉瘤，能够在软琼脂中形成克隆，并且在经过免疫抑制血清处理的小鼠体内具备成肿瘤能力。该细胞株具有四个以上的标志性染色体，包含一个额外的F染色体和两个异常的B染色体。

传代方法方面，建议在细胞生长至80%汇合度时进行1:2的传代。具体步骤如下：当细胞密度超过80%时，应采取传代培养，步骤如下：首先，弃去培养基并用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。接下来，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液置于37℃培养箱中消化1-2分钟，并在显微镜下观察细胞的消化情况。当细胞大部分变圆并开始脱落时，迅速拿起培养瓶轻轻敲击并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。

随后，轻轻吹打将细胞完全脱落后，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000RPM的条件下离心5分钟，弃去上清液后补加1-2ml完全培养基重悬细胞。最后，将细胞悬液按1:2比例分装至两个T25培养瓶中，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并将其置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

对于悬浮细胞的传代，采用半换液法或离心换液法均可。如采用半换液法，应竖着放置培养瓶，在培养箱静置约1小时后，轻轻吸去约3ml培养基，并补充相同体积的完全培养基。如果培养基颜色变化缓慢，可以直接添加约500ul FBS。通常，经过3次这样的传代后，进行一次离心以去除死细胞。

离心换液法过程中，首先将细胞悬液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液后补加1-2ml培养液重悬混匀，然后将细胞悬液按1:2的比例分装至新的T25瓶中，添加6-8ml完全培养基以保持细胞生长的活力。后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存步骤如下：当细胞生长至培养瓶的80%覆盖度时，弃去培养基，用PBS清洗细胞一次；随后加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩并变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟。弃去上清液后，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后置入冻存管内，直接放置于-80℃冰箱中；如需转入液氮罐，需在-80℃冷冻24小时后进行。

细胞复苏时，从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，沉淀后重悬于5ml完全培养基并接种于T25培养瓶，放置在37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养，次日更换为新鲜的完全培养基。

注意事项：在细胞运输过程中，部分细胞可能会脱落，这属于正常现象。如果脱落较多，可将培养瓶内的培养液收集于离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清液进行替代培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止消化，再次离心并重悬于1-2ml的完全培养基中。最后，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并再次放置于37℃、5% CO2培养箱中培养。